（1）問(wèn)：小鼠乙酰膽堿Elisa試劑盒后期數(shù)據(jù)處理中空白的OD值有什么作用？

     答：可以將標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的OD值同時(shí)減去空白的值進(jìn)行計(jì)算，或者都不減，保持同一水平就行。 

（2）問(wèn)：那我們算出來(lái)的ACH含量為什么出現(xiàn)負(fù)值？

     答：說(shuō)明個(gè)別樣本的濃度很低,當(dāng)濃度接近第6個(gè)點(diǎn)的時(shí)候,直線方程就有可能計(jì)算出負(fù)值。

（3）問(wèn)：小鼠乙酰膽堿ELISA試劑盒，組織標(biāo)本 切割標(biāo)本后能用生理鹽水稀釋嗎？還有稀釋的倍數(shù)是多少?

     答：生理鹽水也可以，加入量1:3。

（4）問(wèn)：我想問(wèn)一下，標(biāo)準(zhǔn)品濃度與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值之間是不是線性回歸？檢測(cè)出來(lái)的吸光度值很低一般都存在哪些原因？大部分在0.08左右 ？（大鼠5羥色胺（5-HT）Elisa試劑盒）

     答：是線性回歸。檢測(cè)出來(lái)的值比較低 ，樣本、稀釋、操作等，原因很多，但只要在可操作范圍就行 。 

（5）問(wèn)：做出來(lái)的結(jié)果：標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度呈線性回歸，但是樣品的吸光度都和本體吸光度值接近，正常未予干預(yù)的大鼠血漿都基本沒(méi)有5-HT 表達(dá)，這是什么原因？（大鼠5羥色胺（5-HT）Elisa試劑盒）

     答：樣本、稀釋、室控和機(jī)器操作等，原因都可能造成吸光度都和本體吸光度值接近，好像熒光法里面有種試劑盒可以檢測(cè)滴度。

（6）問(wèn)：Elisa試劑盒的使用的方法是什么�。�

     答：采用雙抗夾心法 （目前暫行）

（7）問(wèn)：一個(gè)孔需要多少量的血清？

     答：一個(gè)孔上樣量10-50微升。

（8）問(wèn):未處理的樣本我需要郵寄多少的量？

     答：每個(gè)孔需要100ul

（9）問(wèn)：樣本怎么保存？

     答：當(dāng)天要用的樣本保存4℃，隔天樣本-20℃（近期一個(gè)月左右要用的樣本），長(zhǎng)期保存樣本-70℃（一年或者更長(zhǎng)時(shí)間多久都可以用），避免反復(fù)凍融。

（10）問(wèn)：EP管是什么管？

      答：離心管。

（11）問(wèn)：收集血清的時(shí)候用什么管？

      答：普通離心管即可。

（12）問(wèn)：96t可以檢測(cè)多少個(gè)樣本？48t可以檢測(cè)多少個(gè)樣本？

      答：96t標(biāo)準(zhǔn)的可以檢測(cè)85個(gè)樣本，其他有10個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔，1個(gè)空白對(duì)照。96t單孔可以檢測(cè)90個(gè)樣，7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品控 1個(gè)空白對(duì)照。48t標(biāo)準(zhǔn)的可以檢測(cè)37個(gè)樣本，其他有10個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔，1個(gè)空白對(duì)照。48t單孔可以檢測(cè)40個(gè)樣本，其他有7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔，1個(gè)空白對(duì)照。

（13）問(wèn)：標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)85個(gè)樣本的和單孔相比， 有什么好的地方嗎？

      答：標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)又叫復(fù)孔檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)重復(fù)性測(cè)的結(jié)果好，所以大家都叫復(fù)孔是標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)。

（14）問(wèn)： 酶標(biāo)板分次使用 剩下的建議怎么保持 ？

      答：要是真的用不完或標(biāo)本不多的情況下。做點(diǎn)處理后：板條和板架都是可拆卸的，可以再用之，前拆下4條放置錫箔袋或其他無(wú)污染的袋子，放到冰箱 2-8度保存。

（15）問(wèn)：酶標(biāo)包被版是酶標(biāo)板嗎？

      答：是的。

（16）問(wèn)：請(qǐng)問(wèn)植物茉莉酸和水楊酸檢測(cè)的試劑盒，我們提取擬南芥的，一般取樣量是多少？

      答：1-3g。

（17）問(wèn)：大鼠骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)ELISA，大鼠血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5B），我發(fā)現(xiàn)試劑盒里缺少標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，沒(méi)有它我的實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行，盒子里面有特殊稀釋液是用來(lái)稀釋樣品的，但都沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，我的樣品已超出檢測(cè)限，所以需要稀釋標(biāo)準(zhǔn)品才行嗎？

     答：特殊稀釋液是用來(lái)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的，特殊稀釋液一般情況不用當(dāng)樣本濃度特別高是先用特殊稀釋液稀釋?zhuān)瑯?biāo)準(zhǔn)品需要再稀釋就也要用特殊稀釋液。

（18）問(wèn)：測(cè)出來(lái)的標(biāo)準(zhǔn)曲線值前面幾盒都是0.98 才正常，后面怎么變成0.93了？

      答：某個(gè)點(diǎn)偏離大可以去掉，保留5個(gè)點(diǎn)

（19）問(wèn)：是不是空白對(duì)照就是什么都不加？

      答：不加樣本，不加樣本稀釋液，不加酶標(biāo)試劑 其他都可以加。

（20）問(wèn)：樣本稀釋液是配好的嗎？

      答：樣本稀釋液是配好的

（21）問(wèn)：樣本稀釋液可以用來(lái)直接稀釋血清嗎？

      答：可以，直接加40ul就可以。

（22）問(wèn)：檢測(cè)的時(shí)候需要在操凈臺(tái)中操作嗎，還是在外面操作就可以了？

      答：要求不是很?chē)?yán)格，根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備而定，都可以。

（23）問(wèn)：人和肽素（copeptin）Elisa，洗滌液是濃縮的，是一次配好，還是現(xiàn)配現(xiàn)用？

      答：濃縮的，現(xiàn)配現(xiàn)用。

（24）問(wèn)：Elisa方法的不測(cè)人血小板第四因子里IgG抗體的滴度嗎？

      答：Elisa不測(cè)滴度的，熒光法可以測(cè)。

（25）問(wèn)：酶標(biāo)板不平，影響結(jié)果嗎？

      答：不影響結(jié)果的。

（26）問(wèn)：小鼠TNF-α ELISA 我的標(biāo)本是細(xì)胞，我想要測(cè)的結(jié)果：抑制TNF的產(chǎn)生  空白組、模型組、藥物組，藥物組要成梯度抑制TNF的產(chǎn)生、請(qǐng)問(wèn)Elisa方法的可以測(cè)嗎？

      答：細(xì)胞可以測(cè) 但要分組，得到相應(yīng)的梯度值，計(jì)算結(jié)果。自己需要多查閱文獻(xiàn) 。

（27）問(wèn)：人睪酮(T)Elisa,人雌三醇（E3）Elisa，是用什么酶標(biāo)記的？

      答：辣根酶標(biāo)記的  標(biāo)本里不能加疊氮化鈉

（28）問(wèn)：我測(cè)植物水楊酸，標(biāo)本是煙草葉片怎么處理的？那上清液檢測(cè)SA時(shí)，還需要用甲醇抽提嗎？

      答：稱(chēng)取煙葉500mg，研磨成粉末狀，加入5ml濃度為0.01mol，PH值為7.4的PBS溶液，充分勻漿，離心取上清液（3000-4000轉(zhuǎn)，15分鐘左右），分裝保存，一般需要長(zhǎng)期保存需放在-80度，或者液氮中，備用，不用加甲醇。

（29）問(wèn)：沒(méi)有做出標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)，你知道什么原因嗎？

      答：操作肯定有問(wèn)題，做之前把標(biāo)準(zhǔn)品搖勻下。

（30）問(wèn)：買(mǎi)同一個(gè)指標(biāo)的幾個(gè)盒子，用不用都做標(biāo)準(zhǔn)曲線？

      答：如果同一個(gè)指標(biāo)買(mǎi)了3盒，建議每盒都做個(gè)標(biāo)曲。同一個(gè)盒子 ，即使分幾次用，做一個(gè)標(biāo)曲也行了，因?yàn)閿?shù)值不會(huì)偏差太大，差不多。

（31）問(wèn)：那個(gè)特殊稀釋液是做什么的？

      答：一般情況都不要用的，他的的用途就是稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。但是,現(xiàn)在標(biāo)準(zhǔn)品已經(jīng)稀釋好了，所以不需要用了。如果你需要更多的標(biāo)準(zhǔn)品的話(huà)，可以用他來(lái)稀釋。

（32）問(wèn)：你們的試劑盒什么成分是進(jìn)口的 什么事國(guó)產(chǎn)的？板子酶標(biāo)和抗體是國(guó)產(chǎn)的還是進(jìn)口的？

      答：抗體、酶標(biāo)試劑、酶標(biāo)板都是進(jìn)口的、其他試劑是國(guó)產(chǎn) 嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作完成 呵呵 

（33）問(wèn)：比如說(shuō)我偶然發(fā)現(xiàn)只加樣本稀釋液的也出現(xiàn)淺黃色，這怎么解釋呢？

      答：可能的原因是：①洗板時(shí)有交叉感染。②樣本稀釋液中本身有本底的一個(gè)較小的讀數(shù)。也是ELISA的一個(gè)局限性，免疫的很多反應(yīng)稀釋液 洗滌液發(fā)揮了很重要的作用，不加的話(huà)效果不明顯，但是加了以后有些成分可能有一部分的干擾作用，可以比較不同的廠家的盒子 都存在這些局限性的，但不影響*終的結(jié)果，ELISA嚴(yán)格的說(shuō)就是一個(gè)半定量的方法。

（34）問(wèn)：那標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)跳孔是怎么回事？

      答：你完全可以拿同樣的標(biāo)準(zhǔn)品再重新做一次 ，做之前搖勻一下，肯定可以做好 。那是操作問(wèn)題了 ，你可以再做一次的，之前也有客戶(hù)出現(xiàn)過(guò)類(lèi)似的問(wèn)題，學(xué)生做了2次都沒(méi)做好，后來(lái)老師自己做，就是搖勻了一下，其他操作都一樣，標(biāo)準(zhǔn)曲線做的很完美。

（35）問(wèn)：建議標(biāo)準(zhǔn)做復(fù)嗎？

      答：標(biāo)準(zhǔn)品做復(fù)孔是的

（36）問(wèn)：血清和腸道粘膜勻漿上清，可以用一個(gè)盒子嗎？

      答：可以！

（37）問(wèn)：36個(gè)樣品，定96T的，可以測(cè)一個(gè)重復(fù)吧

      答：可以

（38）問(wèn)：不同盒子里的孔下次能不能用？

      答：一個(gè)盒子有96孔和48的 要是真的用不完或標(biāo)本不多的情況下，做點(diǎn)處理后在存放。

（39）問(wèn)：什么叫點(diǎn)處理？

      答：板條和板架都是可拆卸的，可以再用之前拆下4條放置錫箔袋或其他無(wú)污染的袋子，放到冰箱 2-8度保存。

（40）問(wèn)：不同批的試劑能不能用？

      答：同樣的盒子不同的批號(hào)或是同一個(gè)批號(hào)，也是不建議混用的。同樣的盒子，分兩次的結(jié)果應(yīng)該是不一樣的，但數(shù)據(jù)部應(yīng)相差太大，應(yīng)在可控制或接受范圍。

（41）問(wèn)：為什么不建議混用？

      答：不同批號(hào)的不可以混用 原因很簡(jiǎn)單若不同批號(hào)的混用的話(huà) 可能得出的結(jié)果不是您想要的 數(shù)據(jù)可能偏差較大

（42）問(wèn)：測(cè)細(xì)胞內(nèi)的蛋白的話(huà)怎樣處理樣本 ？

      答：ELISA實(shí)驗(yàn)前需對(duì)標(biāo)本進(jìn)行處理將目的蛋白釋放出來(lái)，其他按常規(guī)方法處理即可。

（43）問(wèn)：代測(cè)可以直接接受沒(méi)有處理好的樣品嗎？

      答：可以

（44）問(wèn)：每個(gè)肌肉和肝臟樣本，*少需要多少克？

      答：1克就可以了。

（45）問(wèn)：96T的一次用不完，40天以后再用，如何存放？

      答：標(biāo)準(zhǔn)品放-20度 ，其他放4度，并且板條要密封好。

（46）問(wèn)：標(biāo)曲做兩個(gè)重復(fù)少不少？

      答：不少。

（47）問(wèn)：試劑盒不同批次會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響嗎？

      答：有一定的影響，但是影響不是很大。

（48）問(wèn)：能不能直接用軟件分析數(shù)據(jù)呢？

      答：可以，用EXCEL或者用SPSS等統(tǒng)計(jì)軟件。

（49）問(wèn)：是不是空白就是什么都不加嗎？

      答：空白不加樣本，不加樣本稀釋液 ，不加酶標(biāo)試劑，其他都可以加。

（50）問(wèn)：你們這個(gè)試劑盒要多少上樣量？

      答：上樣量沒(méi)有什么限制, 每個(gè)孔的上樣量是10ul。

（51）問(wèn)：我兩個(gè)空白孔一個(gè)啥都不加，一個(gè)加了后面的A液，B液還有終止液, 請(qǐng)問(wèn)用哪一個(gè)？

      答:用加了A液，B液還有終止液的那個(gè)更加準(zhǔn)確,因?yàn)闃颖径技舆^(guò)這些，可以排除相應(yīng)的干擾。

（52）問(wèn)：離心完以后用什么管子保存？

      答：離心完用EP管保存就可以。

（53）問(wèn)：收集病人血液標(biāo)本的時(shí)候用什么管？

      答：用普通的離心管收集就可以

（54）問(wèn)：抗體和底物都是進(jìn)口的吧？

      答：是的，底物就是TMB 進(jìn)口的。

（55）問(wèn)：測(cè)的是不同的物質(zhì)為什么測(cè)的波長(zhǎng)一樣呢？

      答:ELISA的波長(zhǎng)全是450, 這就是ELISA,不一樣的話(huà)，那就是比色法了，不是ELISA。組織勻漿后就可以檢測(cè)。

（56）問(wèn)：說(shuō)明書(shū)寫(xiě)要7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品是做什么用？

      答：7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，只要6個(gè)，第七個(gè)是空白對(duì)照 。 

（57）問(wèn)：抗凝劑可以用EDTA嗎？或者加什么做為抗凝劑？

      答：可以,肝素或者EDTA。

（58）問(wèn)：Elisa代測(cè)結(jié)果表格每組表達(dá)什么？

      答：S1-S5 代表 標(biāo)準(zhǔn)品個(gè)表格是吸光度 第二個(gè)是對(duì)應(yīng)表 第三個(gè)是數(shù)據(jù)處理（是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品那個(gè)線性關(guān)系出來(lái)的）第四個(gè)表*終結(jié)果是都乘以5得到的問(wèn)：為什么×5？答：因?yàn)槲覀冏龅臅r(shí)候是10ul樣本+40ul樣本稀釋液做的 問(wèn)：那個(gè)U是代表什么？答：U是調(diào)零的，什么都不加。 

（59）問(wèn)：為什么檢測(cè)結(jié)果*終結(jié)果單位表達(dá)不一樣？

      答：ng/ml是質(zhì)量單位， pmol/L是濃度單位，一般是沒(méi)法換算的，在采購(gòu)試劑盒時(shí)請(qǐng)用戶(hù)說(shuō)明單位，1ng/ml = 1000pg/ml。
    兩大主題演講完后，臺(tái)下各位科研者以及實(shí)驗(yàn)新手都踴躍提問(wèn)，積極互動(dòng)，上海恒遠(yuǎn)的技術(shù)巡回講座第二站圓滿(mǎn)落幕！我司獲得BIM品牌ELISA試劑盒專(zhuān)業(yè)代理權(quán)，歡迎來(lái)電咨詢(xún)哦！
                    
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